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紫外可見光度計(jì)是根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)某一范圍內(nèi)波長(zhǎng)的電磁波的吸收特性,所建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。其操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。波長(zhǎng)長(zhǎng)(頻率小)的光線能量小,波長(zhǎng)短(頻率大)的光線能量大。分光光度測(cè)量是關(guān)于物質(zhì)分子對(duì)不同波長(zhǎng)和特定波長(zhǎng)處的輻射吸收程度的測(cè)量。描述物質(zhì)分子對(duì)輻射吸收的程度隨波長(zhǎng)而變的函數(shù)關(guān)系曲線,稱為吸收光譜或吸收曲線。紫外可見光度計(jì)的吸收光譜通常由一個(gè)或幾個(gè)寬吸收譜帶組成。吸收波長(zhǎng)(λmax)表示物質(zhì)對(duì)輻射的特征吸收或選擇吸收,它與分子中外層電子或價(jià)電子的結(jié)構(gòu)(或成鍵、非鍵和反鍵電子)有關(guān)。朗伯-比爾定律是分光光度法和比色法的基礎(chǔ)。這個(gè)定律表示:當(dāng)一束具有I0強(qiáng)度的單色輻射照射到吸收層厚度為b,濃度為c的吸光物質(zhì)時(shí),輻射能的吸收依賴于該物質(zhì)的濃度與吸收層的厚度。
紫外可見光度計(jì)由5個(gè)部件組成:
①輻射源。必須具有穩(wěn)定的、有足夠輸出功率的、能提供儀器使用波段的連續(xù)光譜,如鎢燈、鹵鎢燈(波長(zhǎng)范圍350~2500納米),氘燈或氫燈(180~460納米),或可調(diào)諧染料激光光源等。
②單色器 。它由入射、出射狹縫、透鏡系統(tǒng)和色散元件(棱鏡或光柵)組成,是用以產(chǎn)生高純度單色光束的裝置,其功能包括將光源產(chǎn)生的復(fù)合光分解為單色光和分出所需的單色光束。
③試樣容器,又稱吸收池。供盛放試液進(jìn)行吸光度測(cè)量之用,分為石英池和玻璃池兩種,前者適用于紫外到可見區(qū),后者只適用于可見區(qū)。容器的光程一般為0.5~10厘米。
④檢測(cè)器,又稱光電轉(zhuǎn)換器。常用的有光電管或光電倍增管,后者較前者更靈敏,特別適用于檢測(cè)較弱的輻射。近年來還使用光導(dǎo)攝像管或光電二極管矩陣作檢測(cè)器,具有快速掃描的特點(diǎn)。⑤顯示裝置。這部分裝置發(fā)展較快。較的光度計(jì),常備有微處理機(jī)、熒光屏顯示和記錄儀等,可將圖譜、數(shù)據(jù)和操作條件都顯示出來。